Mobilna faza je ekvivalentna tekućoj fazi krvi, a postoje razne stvari na koje treba obratiti pozornost tijekom korištenja. Među njima postoje neke "zamke" na koje treba obratiti pozornost.
01. Izmjerite pH mobilne faze nakon dodavanja organskog otapala
Ako pH mjerite s organskim aditivom, pH koji dobijete bit će drugačiji nego prije dodavanja organskog otapala. Ipak, najvažnije je biti dosljedan. Ako uvijek mjerite pH nakon dodavanja organskog otapala, svakako navedite svoje korake u metodi koju koristite kako bi drugi slijedili istu metodu. Ova metoda nije 100% točna, ali će barem održati metodu dosljednom. Ovo može biti važnije od dobivanja točne pH vrijednosti.
02. Nije korišten međuspremnik
Svrha pufera je kontrolirati pH i spriječiti njegovu promjenu. Mnoge druge metode mijenjaju pH mobilne faze, što može uzrokovati pomake u vremenu zadržavanja, obliku vrha i odgovoru vrha.
Mravlja kiselina, TFA, itd. nisu puferi
03. Ne koristite pufer unutar normalnog pH raspona
Svaki pufer ima širinu raspona od 2 pH jedinice, unutar kojih pruža najbolju pH stabilnost. Puferi izvan ovog prozora neće pružiti učinkovitu otpornost na promjene pH vrijednosti. Koristite pufer u ispravnom rasponu ili odaberite pufer koji pokriva pH raspon koji vam je potreban.
04. Dodajte pufer u organsku otopinu
Miješanje puferske otopine s organskom fazom najvjerojatnije će uzrokovati taloženje pufera. U mnogim slučajevima, čak i ako je oborina bilo, još uvijek ju je teško otkriti. Ne zaboravite uvijek dodati organsku otopinu u vodenu fazu, što može uvelike smanjiti mogućnost taloženja pufera.
05. Pomiješajte gradijent koncentracije od 0% s pumpicom
Pumpe koje su danas dostupne mogu učinkovito miješati mobilne faze i linijski otplinjavati, ali neće svi koji koriste vašu metodu imati pumpu visoke kvalitete. Pomiješajte A i B u jednu otopinu i pokrenite je 100% inline.
Na primjer, 950 ml organske početne smjese može se pripremiti miješanjem s 50 ml vode. Prednost ovoga je što može smanjiti varijabilnost između HPLC-a i smanjiti mogućnost mjehurića i taloženja u sustavu. Vrijedno je napomenuti da je omjer mješavine pumpe 95:5, što ne znači da je i vrijeme zadržavanja prethodno smjese u boci 95:5.
06. Ne koristite ispravnu modificiranu kiselinu (bazu) za promjenu pufera
Koristite samo kiselinu ili bazu koja tvori pufersku sol koju koristite. Na primjer, natrijev fosfatni pufer treba pripremiti samo s fosfornom kiselinom ili natrijevim hidroksidom.
07. Nenavođenje svih informacija o puferu u metodi, kao što je dodavanje 5 gnatrijev fosfat na 1000 ml vode.
Vrsta pufera određuje pH raspon koji se može puferirati. Potrebna koncentracija određuje snagu pufera. 5 grama ili bezvodnog natrijevog fosfata i 5 grama mononatrijevog fosfat monohidrata imaju različite jačine pufera.
08. Dodavanje organskih otapala prije provjere
Ako je prethodna metoda koristila otopinu pufera za osnovnu liniju B, a vaša metoda koristi organsku otopinu za osnovnu liniju B, nadamo se da možete taložiti pufer u cijevi pumpe i glavi pumpe.
09. Podignite bocu i ispraznite zadnju kap
Postoji velika vjerojatnost da nećete imati dovoljno mobilne faze za dovršetak cijelog ciklusa i da će se vaš uzorak dimiti. Osim mogućnosti izgaranja sustava crpke i kolone, mobilna faza će potpuno ispariti, a mobilna faza na vrhu boce će se promijeniti.
10. Upotrijebite mobilnu fazu za ultrazvučno otplinjavanje
Najvažnije je osigurati da su sve puferske soli otopljene, ali ovo je najgori način za degažiranje i brzo će zagrijati mobilnu fazu, uzrokujući isparavanje organskih komponenti. Kako biste kasnije uštedjeli nepotrebne probleme, odvojite pet minuta za vakuumsko filtriranje svoje mobilne faze.
Vrijeme objave: 27. kolovoza 2024